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口腔拭子基因組DNA提取試劑盒規格的相關(guān)產(chǎn)品:晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體軟骨聚糖/可聚多糖抗體聚集抗體
更新時(shí)間:2022-02-10
PCR實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
操作流程:
收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽(yáng)性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數據庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存。
特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 貨號 |
口腔拭子基因組DNA提取試劑盒規格 | 50次/盒、50次/盒 | FS-01H3227 |
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對每個(gè)樣品Ct值的計算,根據標準曲線(xiàn)獲得定量結果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內標是建立在兩個(gè)基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數擴增期(對數期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性同一模板不同時(shí)間擴增或同一時(shí)間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數存在線(xiàn)性關(guān)系,可利用標準曲線(xiàn)對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標準曲線(xiàn)定量的方法。
外標準曲線(xiàn)的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標準曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴增(其中一個(gè)引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時(shí),內標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內標與靶模板的長(cháng)度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測定其熒光強度,以?xún)葮藶閷φ斩看龣z測
使用方法:
一、稀釋標準曲線(xiàn)樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽(yáng)性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標準曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標準曲線(xiàn)。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對照。
13054-87-0(+)2-氨基丁 規格: 100mg
58-86-6木糖;純品型;標準品;有證書(shū) 規格: 0.25g
62006-39-7洋川芎內酯A 規格: 20mg
491-50-9槲皮-7- 規格: HPLC≥98%,20mg/支
規格: 100mg
倍他環(huán)糊精 規格: 100mg
30252-40-5藏紅花;Potassium 7-Hyd 規格: 20mg
177931-17-8三白草 規格: 20mg
比可啶 規格: 50mg
飛揚草 規格: 1g
口腔拭子基因組DNA提取試劑盒規格POMT1 甘露糖基轉移1抗體 規格: 0.2ml
Laminin 1+2 層粘連1+2抗體 規格: 0.1ml
NAP1L2 腦特異性BPX抗體 規格: 0.2mlHepatitis E Virus ORF3 戊型肝炎病毒抗體 規格: 0.1ml
GIG22/DNAJC15 細胞生抑制22抗體(甲基化控制J) 規格: 0.2ml
TM7SF2/DHCR14A 脫還原14抗體 規格: 0.2mlPKA R2/PKA IIα 激A受體2α亞基抗體 規格: 0.2ml
GNAO1/G0 Protein alpha G偶聯(lián)受體結合O亞基A2抗體 規格: 0.2ml14-3-3 family protein 蘋(píng)果14-3-3抗體(植物) 1ml
Phospho-Rb (Thr821) 磷化視網(wǎng)膜母細胞瘤相關(guān)1抗體 規格: 0.1ml
Claudin 1 緊密連接1抗體 規格: 0.1ml
phospho-PKA R2 (Ser96) 磷化激A受體2α亞基抗體 規格: 0.1ml
Phospho-Tuberin/TSC2 (Thr1462) 磷化馬鈴薯球(結節性硬化)抗體 規格: 0.1ml
Caspase-13/4 半胱胺-13抗體 規格: 0.2ml